Determinacíon de los grupos sanguìneos ABO/Rh combinado con la prueba inversa o grupo sérico
Introducción
Los antisueros anti-A y anti-B son necesarios, para demostrar la presencia o ausencia de los antígenos A / B en hematíes humanos.La determinación de los grupos sanguíneos ABO requiere la realización de una contraprueba serológica o grupo inverso con plasma o suero para confirmar los resultados obtenidos en la prueba hemática.
Para la contraprueba serológica se utilizan hematíes con una especificidad antígeno-ABO conocida, para detectar la presencia o ausencia en el plasma o suero de las isoaglutininas anti-A y anti-B. Una discrepancia entre la determinación del antígeno y la contraprueba exigen ampliar el estudio. La tarjeta ID-Card ˝DiaClon ABO/D + Reverse Grouping˝ permite en una ID-tarjeta determinar el grupo hemático y el grupo sérico para ABO, así como la determinación del antígeno RhD.
Reactivos
La tarjeta ID-Card ˝DiaClon ABO/D + Reverse Grouping˝ contiene anti-A monoclonal,anti-B y anti-D, en la matriz de gel.El microtubo (ctl) es el control negativo. La tarjeta-ID contiene también dos microtubos con gel neutro que sirven para la prueba inversa del grupo sanguíneo con hematíes A1 y B.
Conservante: < 0,1% NaN3.
Precaución: Todos los reactivos deben tratarse como potencialmente infecciosos. No almacenar en las proximidades de fuentes de calor, aire acondicionado o ventilación.
Estabilidad: véase fecha de caducidad en la etiqueta.
Reactivos adicionales necesarios
• ID-Diluent 2: LISS modificado para la preparación de las suspensiones de hematíes.• Hematíes-tests: ID-DiaCell A1 + B en una suspensión al 0,8%, en viales de 10 ml, listos para su uso.
Otros materiales necesarios
• ID-Dispenser• ID-Pipetor
• ID-Tips (puntas para el pipetor)
• Tubos para suspensiones
• ID-Mesa de trabajo
• ID-Centrífuga 6, 12 ó 24
Muestras
Para un resultado óptimo, la determinación debe realizarse con una muestra recién extraída, o cumpliendo la normativa local del laboratorio en cuanto a criterios de aceptabilidad de las muestras.Cuando sea necesario emplear suero en vez de plasma, el suero debe someterse a una centrifugación a 1500 g durante 10 minutos antes de su uso, para evitar la presencia de residuos de fibrina que podrían interferir con el patrón de reacción.
En nuestro caso usamos sangre artificial guardada en el frigorífico.
Preparación de la muestra de sangre
a) Para la determinación de ABO/D Preparar una suspensión de hematíes al 5% en ID-Diluent 2 como sigue: Dejar que el diluyente alcance la temperatura ambiente antes de su utilización.1. Pipetar 0,5 ml de ID-Diluent 2 en un tubo limpio.
2. Agregar 50 µl de sangre total o 25 µl de concentrado de hematíes, mezclar cuidadosamente. La suspensión de hematíes puede utilizarse inmediatamente.
b) Suero o plasma para el sérico o contraprueba Controles Deben incluirse muestras positivas y negativas conocidas de acuerdo con las normas de garantía de calidad aplicables.
Procedimiento de la prueba
No usar las tarjetas ID-Card que muestren signos de desecación, burbujas en el gel, sellado defectuoso, gotas de gel o de sobrenadante en la parte superior de los microtubos o en la superficie interior del aluminio de sellado. Dejar que los hematies reactivo alcancen la temperatura ambiente.1. Identificar la tarjeta ID-Card con el número o nombre de identificación del donante o del paciente.
2. Retirar la lámina de sellado sólo de los microtubo que se vayan a utilizar manteniendo la ID-Tarjeta en posición vertical.
3. Pipetear 50 ul de ˝ID-DiaCell A1˝ en el microtubo 5 (A1).
4. Pipetear 50 µl de ˝ID-DiaCell B˝ en el microtubo 6 (B).
5. Agregar 50 µl plasma en los microtubos 5 y 6. Se recomienda una incubación de 10 minutos a temperaura ambiente
6. Agregar 10 ó 12,5 µl de la suspensión de hematíes del paciente en los microtubos 1–4 (A, B, D, ctl).
7. Centrifugar la tarjeta ID-Card durante 10 minutos en la ID-Centrífuga. 8. Leer y anotar las reacciones.
No salió bien, por lo que pensamos que fue que la dilución no la hicimos correctamente.
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