Tinciones

Tinciones de una preparación

Fundamento:

Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objetivo el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean visualizadas microscópicamente con mayor facilidad.

Es una tinción de tipo no vital, en ella las células están muertas y su coloración requiere un proceso de fijación previo normalmente se realiza con etanol o metanol. 

Es una tinción habitual que se logra mediante el uso de colorantes derivados de la Anilina (eosina y azul de metileno) junto con unos derivados por oxidación del azul de metileno, que se conocen como azures (azur A, azur B y azur C). Estas sustancias son responsables de la coloración púrpura o roja de la cromatina.

• Colorantes ácidos: tiene afinidad especial con las estructuras alcalinas de las células (hemoglobina) 
• Colorantes básicos : tienen afinidad especial con las estructuras ácidas de las células.

Por ello, para clasificar los elementos celulares de una fórmula leucocitaria, atendemos preferentemente a la forma con que se tiñen selectivamente sus granulaciones citoplasmáticas y por tanto: 

Los elementos celulares que se tiñen con EOSINA (colorante ácido) se denominan EOSINOFILOS.

Los elementos celulares que se tiñen con AZUL DE METILENO (colorante básico) se denominan BASOFILOS. 

Los elementos celulares que se tiñen con EOSINATO-AZUL DE METILENO (colorante neutro) se denominan NEUTROFILOS. 

Esto es válido, fundamentalmente para la llamada serie granulocítica. 

Cuando se emplean colorantes que van en solución alcohólica no es necesario fijar la preparación. En cambio cuando se utilizan colorantes que van en solución acuosa, lo primero que hay que hacer es fijarla, y para ello se hace pasar el frotis por una de estas sustancias: 

• Alcohol etílico durante 10-12 min. 
• Alcohol metílico durante 3-5 min. 

COLORANTE WRIGHT para diagnostico "in vitro"

Procedimiento:

1.La extensión secada al aire y sin fijar, se cubre totalmente con un volumen conocido de colorante (1ml)que se deja actuar durante 5min

2.Posteriormente se añade, gota a gota, igual volumen de agua tamponada (pH6.8) soplando ligeramente con la pipeta para conseguir una mezcla homogénea.

3. Después de 5 min. se vierte el colorante, se lava con agua tamponada y se deja secar al aire.

PANOPTICO RAPIDO para diágnostico "in vitro"

Material:

• Un frotis con sangre humana 
• Tres cubetas de wertheim 
• Agua destilada 
• Pinzas 
• Solución 1: Metanol (fijador) 
• Solución 2: Santeño (ácido) 
• Solución 3: Tiacina (básico)

Procedimiento:

1.Disponer de coplorante Nº1, Nº2 y Nº3 en cubetas.

2. Sumergir el porta durante 5 segundo (5 inmersiones de 1 seg) en la dilución colorante Nº1, escurrir.

3.Sumergir acontinuación otros 5 segundos (5 inmersiones de 1 seg) en la disolución coloranyte Nº2 , escurrir de nuevo.

4.Sumergir, finalmente otro 5 segundos (5 inmersiones de 1 seg) en la disolución colorante Nº3

5.Lavar con agua del grifo y dejar secar.

COLORANRE GIEMSA para diagnóstico "in vitro"

Fundamento:

La técnica que se utiliza es la de decantación e inundación en la que las preparaciones están en posición horizontal, se vierte el colorante encima y se elimina decantando, es decir, inclinando el porta para que el líquido se caiga. Esta técnica utiliza una combinación de colorantes que da lugar a una tinción policroma. 

Material:

• Frotis con sangre
• Agua destilada
• Cubeta de tinción. 
• Pipeta Pasteur 
• Tubo de ensayo 
• Gradilla 
• Paralelas 
• Colorante Giemsa (contiene Azul de metileno, eosina y azur ІІ)

Procedimiento:

1. El colorante se diluye 1/10con agua tamponada antes de su uso.

2.Una de las extensiones secadas al aire, se fija con alcohol metílico durante 3 min

3.Decantado el metanol y sin lavar la preparación, se cubre esta con el colorante diluido, que se deja actuar durante 10min.

4.Lavamos con abundante agua tamponada y dejamos secar al aire.