Coomb indirecto

Determinación del Coombs directo en tubo

Objetivo:

Determinar si existe o no anticuerpos irregulares o incompletos fijados en la membrana de los hematíes del paciente enfrentando éstos reactivos de Coombs específico para ello.

Material:

• Material para lavado y dilución de los hematíes
• Tubo de hemólisis
• Pipetas pasteur, visualizador.

Reactivo:

• AGH y SF
• Hematíes control sensibilizados con IgG
• Sangre anticuagulada

Precauciones:
Es preferible que la sangre esté anticoagulada con EDTA, porque así se evita la sensibilización de los hematíes in vitro por la activación del complemento.

Prodecimiento:

1. Realizamos un lavado de los hematíes de la muestra-problema:
En un tubo echamos 1.5 ml de sangre
El resto del tubo se llenó de agua destilada, agitamos cuidadosamente y centrifugamos a 2500 rpm 5 min.

Después quitamos el sobrenadante y repetimos dos veces más este proceso.

Con los hematíes lavados hicimos una dilución del 5 %

2.Depositamos 4 gotas de AGH en un tubo pequeño.

3. Situamos 4 gotas de la suspensión de hematíes de la miuestra problema en el tubo junto a la AGH y agitamos suavemente.

4. Centrifugamos a 2500rpm durtante 1 min.

5. Resuspendemos el sedimento de hematíes dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo.

6. Observar la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizador .
Resultados:
Como no había aglutinación era negativo.