Determinación de coombs directo

Determinación de coombs directo en tubo.

Objetivo

Determinar si existen o no anticuerpos irregulares o incompletos fijados en la membrana de los hematíes del paciente enfrentando estos al reactivo de coombs específico para ello.

Fundamento:

Detectar hematíes sensibilizados y asi poder intervenir en la anemia hemolítica autoinmune.

Materiales:

• Material para el lavado y dilución de los hematíes: tubos y pipeta pasteur.
• Tubo de hemólisis

Reactivos:

• AGH y SF
• Hematíes control sensibilizados con IgG (hematíes reactivo que han sido sensibilizados industrialmente).

Muestra

• Sangre anticoagulada con EDTA.

Aparatos y equipos

• Visualizador
• Centrifuga

Procedimiento:

1.Realizamos un lavado de los hematíes de la muestra problema: 

• Echamos 1.5ml de sangre en un tubo.
• El resto del tubo lo llenamos con SF
• Centrifugamos a 2500rpm durante 5 min
• Eliminamos el sobrenadante y lo dos últimos pasos anteriores los repetimos tres veces mas.

-A continuación hacemos una dilución al 5 %

• Con 950ul + 50uñl de suspensión de hematíes.

2.Depositamos 4 gotas de AGH en un tubo pequeño.

3.Situamos 4 gotas de la suspensión de hematíes de la muestra problema en el tubo junto a la AGH y agitar suavemente

4.Centrifugamos a 2500rpm durante 1 min.

5. Resuspendemos el sedimento de hematíes dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo.

6. Observamos la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizador.

Resultados

Ausencia de aglutinación, por lo tanto un resultado negativo debido a que los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.

Errores y fallos

Quizás el fallo estén en los reactivos debido a la cantidad de tiempo que llevan en el frigorífico, las condiciones de ensayo...

Conclusiones

Gracias a este tipo de practicas podemos familiarizarnos mas con los protocolos básicos de los procesos de la sangre como el lavado de hematíes y ademas es una practica muy visual a la hora de estudiar.

Esquema