Fosfatasa

Identificación de la actividad de la fosfatasa alcalina en leucocitos

Principio

Para la determinación citoquímica de una leucemia mieloica crónica de otras enfermedades del tipo de formas mielo-proliferativas, especialmente frente a la mielofibrosis y la policitemia o, respectivamente, otros procesos inflamatorios o tumurosos, es adecuada la determinación de la actividad de la fosfatasa alcalina de leucocitaria. Además, el índice de la fosfatasa alcalina de leucocitaria representa un parámetro sencillo del transcurso en el caso de CML, que refleja diversas fases de la actividad de la enfermedad hematológica.

La fosfatasa alcalina de leucocitaria cataliza la hidrolisis de ésteres fosfóticos en medio alcalino. El naftol liberado a partir del fosfato de 1-naftilo se acopla con una sal de diazonio para dar un azocolorante pardo, que precipita en la célula de acuerdo con la localización y la actividad de la fosfatasa alcalina en la célula.

Material

Componentes del kit

Sangre sin anticuagulada.

Preparación de la muestra.

1. Hacemos un frotis sanguíneo, con sangre capilar
NOTA: nosotras aquí nos equivocamos, ya que cogimos capilares con anticuagulante

2. Dejamos secar durante 30 min.

3.Fijamos los frotis sanguíneos en la mezcla fijadora LUCOGNOST durante 1-3 min.

                                      

Preparación de reactivos

Solución de tinción 

1. Echamos 4 cucharadas dosificadas rasa: 1.1g del reactivo 1 en 100 ml de agua destilada. SOLUCIÓN A

2. Echamos el contenido completo del frasco de reactivo 2 y 15 ml de la solución A. SOLUCIÓN B

3. Echamos el contenido completo del frasco 3 y 45 ml de la solución A. Filtramos esta solución a la cuneta de la solución B.

Tecnica

1.Introducimos el portaobjetos en la tinción recién preparada 30min

2. Introducimos el portaobjetos en agua destilada 5 min.

3. Introducimos el portaobjetos en la contratinción con hemalumbre en solución según mayer 5 min

4.Enjuagar con agua corriente del grifo 5 min 

5. Secar al aire y observar a microscopio.